競爭ELISA

此法主要用于測定小分子抗原及半抗原，其原理類似于放射免疫測定。其基本程序為：

① 抗體包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干

② 加入待檢抗原及一定量的酶標抗原（對照孔僅加酶標抗原）→ 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干

③ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液

④ 用ELISA檢測儀測定OD值。

被結合的酶標抗原的量由酶催化底物反應產(chǎn)生有色產(chǎn)物的量來確定，如果待檢溶液中抗原越多，被結合的標記抗原的量就越少，有色產(chǎn)物就減少，這樣根據(jù)有色產(chǎn)物的變化就可求出未知抗原的量。此法的優(yōu)點在于快速、特異性高、且可用于小分子抗原及半抗原的檢測；其主要不足在于每種抗原都要進行酶標記，而且因為抗原的結構不同，還需應用不同的結合方法。此外，試驗中應用酶標抗原的量較多。

阻斷ELISA

本法主要用于檢測型特異性抗體。該方法現(xiàn)已成為豬傳染性胃腸炎（TGE）、豬偽狂犬?。?span>PR）及豬胸膜肺炎（AP）的主要檢測方法。下面以AP2型抗體的阻斷ELISA檢測法為例介紹其操作程序：

① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃過夜，洗滌三次、拋干

② 用200μl阻斷緩沖液進行封閉 → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干

③ 加工作量1:4稀釋被檢豬血清100μl → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干

④ 加100μl工作量兔抗AP2型血清 → 37℃ 30分鐘，洗滌三次、拋干

⑤ 加100μl工作量豬抗兔IgG-HRP → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干

⑥ 加100μl OPD底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液

⑦ 用ELISA檢測儀測定OD值。

本試驗同時設標準陰、陽性血清對照、兔抗AP2型陽性對照、空白對照。

抗體捕捉ELISA

本法主要用于檢測IgM抗體。由于IgM抗體出現(xiàn)于感染早期，所以檢測出IgM，則可作為某種疾病的早期診斷?？贵w捕捉ELISA根據(jù)所用標記方式不同可分為標記抗原、標記抗體、標記抗抗體捕捉ELISA等幾種，其中以標記抗原捕捉ELISA比較有代表性，該方法的主要程序為：

① 用抗u鏈（抗IgM重鏈）抗體包被→37℃ 60分鐘后置4℃過夜，洗滌三次、拋干

② 加待檢血清 → 37℃ 2小時，洗滌三次、拋干

③ 加酶標抗原 → 37℃ 60分鐘，洗滌三次、拋干

④ 加底物液 → 37℃ 20分鐘，加終止液

⑤ 用ELISA檢測儀測定OD值。

斑點ELISA

與常規(guī)的微量板ELISA比較，Dot-ELISA具有簡便、節(jié)省抗原等優(yōu)點，而且結果可長期保存；但其也有不足，主要是在結果判定上比較主觀，特異性不夠高等。該方法的主要操作程序為：

⑴載體膜的預處理及抗原包被　取硝酸纖維素膜用蒸餾水浸泡后，稍加干燥進行壓圈。將陰性、陽性抗原及被檢測抗原適度稀釋后加入圈中，置37℃使硝酸纖維素膜徹底干燥。每張7cm×2.3cm的膜一般可點加40－53個樣品，每個壓圈可加抗原液1－20μl。

⑵ 封閉　將硝酸纖維素膜置于封閉液中，37℃感作15－30分鐘。封閉液多采用含有正常動物血清、pH7.2或pH7.4的PBS。

⑶ 加被檢血清　可直接在抗原圈上加，也可剪下抗原圈、置于微量板孔中，再加入一定量適度稀釋的待檢血清，37℃反應一定時間，用洗滌液洗三次，每次1－3分鐘。洗滌液一般為一定濃度的PBS-Tween溶液。

⑷ 加酶標抗體，37℃反應一定時間后，用洗滌液洗三次。

⑸顯色　加入新鮮配制的底物液，37℃反應一定時間后，去掉底物液，加蒸餾水洗滌終止反應。

⑹ 結果判定　以陽性、陰險血清作為對照，膜片中央出現(xiàn)深棕紅色斑點者為陽性反應，否則為陰性反應。

布ELISA

（C－ELISA） C－ELISA（Cloth-ELISA）是加拿大學者Blais,B. W.等于1989年建立的一種新型免疫檢測技術。該方法是以疏水性聚脂布（Hydrophobic Polyester Cloth）即滌綸布為固相載體，這種大孔徑的的疏水布具有吸附樣品量大，可為免疫反應提供較大的表面積，提高反應的敏感性，且容易洗滌，不需特殊儀器等優(yōu)點。其基本原理與Dot-ELISA類似，只是載體不同。以對布氏桿菌抗原的檢測為例，C－ELISA的主要程序為：

⑴ 首先把抗布氏桿菌的血清包被（吸附）在聚脂布上，并經(jīng)洗滌及封閉；

⑵ 加被檢樣品并于室溫下感作30分鐘，然后洗5次；

⑶ 加酶標記的抗布氏桿菌抗體，于室溫下感作30分鐘，然后洗滌5次；

⑷ 加入底物液顯色；

⑸ 測定OD值。